Anti-Fya
Coombs-reactive (polyclonal, human)
Anti-Fyb
Coombs-reactive (polyclonal, human)
For indirect Coombs-test
FOR IN VITRO DIAGNOSTIC USE ONLY
INTRODUCTION
Polyclonal Coombs-reactive Anti-Fya and -Fyb - testsera are produced from human plasma
that containing a specific antibody of IgG-type, which reacts exclusively with the
corresponding antigen. The testsera are used to determine whether red blood cells possess
or lack the corresponding blood group antigens Fya and Fyb. The testsera are intended be
used by qualified and technical personnel only.
PRINCIPLE OF PROCEDURE
The procedures used with these reagents are based on the principle of agglutination.
Normal human erythrocytes, possessing one of these antigens, will be recognized and
coated by the corresponding specific antibody and than the cells will be agglutinated by a
secondary antibody, that reacts with human IgG-molecules.
REAGENTS
The listed reagents are available in a formulation, with differences in specificity for the
antibody only:
Anti-Fya Coombs-reactive (polyclonal, human)
Anti-Fyb Coombs-reactive (polyclonal, human)
Both reagents contain <0.1% (w/v) sodium azide as preservative. Beside the parts active
antibody and human serum the reagents contain sodium chloride, macromolecules and
bovine albumin.
WARNING
These reagents were prepared from human plasma. The raw material for this product is
tested for HBsAg, HIV- and HCV antibodies and found to be negative. Nevertheless as
biological products it should be looked upon as potentially infectious because of never
complete exclusion of danger through excitants of disease. The reagents contain sodium
azide, that may be toxic and may react with lead or copper to form highly explosive salts.
Because of these reasons reagents should be handled with proper care.
STORAGE REQUIREMENT
Store at 2 to 8°C. May be at room temperature (15 to 30°C) while in use. Store and use the
reagents only to declared expiry date in principle.
REMARKS
1. Strength of positive reactions also depends on age of used blood.
2. With each testing positive and negative controls should be executed.
3. Weak turbidity of the reagent does not affect its reactivity.
4. Inappropriate storage impairs efficacy of the reagent.
5. Centrifugation highly different from appointed relative centrifugal force will lead to faulty
results.
6. Blood samples to be tested should be used as soon as possible. If a delay in testing
occurs, samples should be stored at 2 to 8°C. Blood drawn into sodium citrate or EDTA
should be tested within 14 days.
7. The procedures identified below are for manual testing only. When using automated
instruments, follow the procedures that are contained in the operator’s manual provided
by the device manufacturer. Laboratories must follow approved validation procedures to
demonstrate compatibility of this product on automated systems.
8. For usage of this testsera all effective national laws, directives and guidelines have to be
observed, in Germany especially the „Richtlinien zur Gewinnung von Blut und
Blutbestandteilen und zur Anwendung von Blutprodukten (Hamotherapie)“.
REAGENT PREPARATION
There is no preparation of the reagents required. Use reagent directly from the vials.
PROCEDURE
Not provided material additionally needed
at Tube Centrifugation Method
1. Test tubes, 10 x 75 mm or 12 x 75 mm
2. Pipettes designed to deliver approximately 100 μL
3. Centrifuge
4. Isotonic saline; 0,85 - 0,9% sodium chloride
5. Anti-Human-Globulin-serum (Coombs-serum)
Test procedure
Tube Centrifugation Method
1. Use a 2% to 5% suspension of red blood cells in isotonic saline (cells washed one time
or up to three times with isotonic saline) only.
2. Add 100 μL (alternative: one drop = approximately 50 μL) of appropriate reagent to each
tube
3. Add 100 μL (alternative: one drop = approximately 50 μL) of appropriate cell suspension
to each tube
4. Mix well by slightly shaking.
5. Incubate tube at 37 °C for 30 min.
6. Wash red cells 3 times with (cold) isotonic saline.
7. Add 100 μL Anti-Human-Globulin-serum (Coombs-serum) to each tube
8. Centrifugation of tube for 1 min at 1.000 rpm (approximately 180-270 x g).
9. Gently resuspend the red cells and check macroscopically for agglutination within 3
minutes. Document the result.
INTERPRETATION OF RESULTS
" Slightly shaking " at Tube Centrifugation Method
Positive results (+): visible agglutination of erythrocytes is a positive result and indicates
the presence of the corresponding antigen.
Negative results (-): No visible agglutination of erythrocytes is a negative result and
indicates the absence of the corresponding antigen.
LIMITATIONS OF THE PROCEDURE
1. Inaccuracy at compliance with instructions written under section “Procedures” and
“Interpretation of results” may produce incorrect results.
2. Enzyme treated erythrocytes may react unspecific.
3. Due to variability of antigen expression, reactivity of these reagents against certain
phenotypes may give weaker reactivity compared to control cells.
4. Red blood cells coated with alloantibodies or autoantibodies of the same or similar
specificity as the reagent (i.e., cells that are positive in the direct antiglobulin-test (DAT))
are not suitable for this test procedure.
5. The described procedures for testing are for usage with Coombs-serum produced by
Antitoxin GmbH. On principle Coombs-sera of other manufacturers can be used, but
laboratories have to follow the procedures of this manufacturer. Also laboratories must
follow approved validation procedures to demonstrate compatibility of this product.

Анти-Fya
Кумбс-реактив (поликлональный, человеческий)
Анти-Fyb
Кумбс-реактив (поликлональный, человеческий)
Для непрямого теста Кумбса:
Только для диагностика in vitro

НАЗНАЧЕНИЕ
Поликлональная агглютинирующая тест-сыворотка Анти-Fya и -Fyb изготовлена из человеческой плазмы, содержащей специфичные антитела класса IgG, которые избирательно взаимодействуют с соответствующими антигенами.  Тест-сыворотка определяет наличие или отсутствие антигенов Fya и Fyb. Тест-сыворотка может использоваться только квалифицированным персоналом.
ПРИНЦИП ИССЛЕДОВАНИЯ
Исследование с использованием данных реагентов основано на принципе агглютинации. Нормальные человеческие эритроциты, покрытые соответствующими антигенами, распознаются и покрываются с соответствующими специфическими антителами, затем агглютинируют за счет других антител, которые взаимодействуют с молекулами человеческого IgG.
РЕАГЕНТЫ
Перечисленные реагенты содержат:
Анти-Fya Кумбс-реактив (поликлональный, человеческий)
Анти-Fyb Кумбс-реактив (поликлональный, человеческий)
Все реагенты содержат <0,1 % азида натрия в качестве консерванта. Также реагенты содержат активные антитела,  хлорид натрия, макромолекулы и альбумин бычьей крови.
ПРЕДУПРЕЖДЕНИЕ
Данные реагенты изготовлены из человеческой плазмы. Биологические материалы, используемые для данного продукта, обследованы на наличие антител к HBsAg, HIV- and HCV (отрицательная реакция). Тем не менее, данный биологический продукт следует рассматривать в качестве потенциально инфицированного, не исключайте опасности заражения вследствие наличия возбудителей заболевания. Реагент содержит азид натрия, который может быть токсичным и реагировать со свинцом или медью, образуя взрывоопасные соединения. Вследствие этого реагент должен использоваться с большой осторожностью.
УСЛОВИЯ ХРАНЕНИЯ
Хранить при температуре 2 – 8С. В процессе использования могут находиться при комнатной температуре (15 – 30С). Храните и используйте реагенты до указанной даты истечения срока годности. При соблюдении условий хранения после вскрытия флакона сохраняют рабочие характеристики до даты истечения срока годности.
ПРИМЕЧАНИЯ
1.	Сила положительной реакции зависит от возраста используемой крови
2.	В каждом исследовании должен выполняться положительный и отрицательный контроль. 
3.	Слабое помутнение реагента не влияет на его активность.
4.	Ненадлежащее хранение способствует снижению активности реагента.
5.	Сила центрифугирования, отличная от указанной, может привести к неправильным результатам.
6.	Образцы крови по возможности должны быть исследованы как можно быстрее. Если исследования задерживаются, образцы должны храниться при температуре  2 – 8С. Кровь с цитратом натрия или ЭДТА должна исследоваться в течение 14 дней. 
7.	Исследования, описанные ниже, подходят только для ручного метода. При использовании автоматического и полуавтоматического оборудования следуйте предоставленному производителем Руководству по использованию инструмента. Сотрудники лабораторий должны следовать установленным системам оценки исследований, чтобы удостовериться в идентичности результатов, полученных ручным и автоматическим методом.
8.	Перед использованием данной тест-сыворотки нужно ознакомиться с соответствующими национальными законами: приказами, директивами, инструкциями. (В оригинальных инструкциях дана ссылка на соответствующие немецкие законодательные акты).
ПРИГОТОВЛЕНИЕ РЕАГЕНТА
Реагент готов к применению. Используйте реагент прямо из флакона.
ИССЛЕДОВАНИЕ
Реагент не обеспечен материалом, дополнительно требуются:
Для метода центрифугирования в пробирке: 
1.	Пробирки 10 х 75 или 12 х 75 мм, 
2.	Пипетки с возможностью дозирования 100 мкл, 
3.	Центрифуга,
4.	Изотонический раствор (0,85 – 0,9 % натрия хлорида), 
5.	Антиглобулиновая сыворотка Кумбс-реактив.
Алгоритм исследования
Метод центрифугирования в пробирке
1.	Используйте 2 % или 5 % суспензию эритроцитов в изотоническом растворе (эритроциты, однократно или многократно промытые изотоническим раствором).
2.	Добавьте 100 мкл (одна капля = примерно 50 мкл) соответствующего реагента в каждую пробирку.
3.	Добавьте 100 мкл (одна капля = примерно 50 мкл) соответствующей суспензии эритроцитов в каждую пробирку.
4.	Хорошо перемешайте путем легкого встряхивания.
5.	Инкубируйте пробирку при  37С  в течение 30 мин.
6.	Трижды промойте эритроциты в (холодном) изотоническом растворе.
7.	Добавьте 100 мкл реактива Кумбса в каждую пробирку.
8.	Центрифугируйте пробирки 1 мин при 1000 об./мин (примерно 180 – 270 г).
9.	Осторожно ресуспензируйте эритроциты и наблюдайте агглютинацию в пределах 3 мин. Запишите результат.
ИНТЕРПРЕТАЦИЯ РЕЗУЛЬТАТОВ
Легкое вращение/встряхивание в методе центрифугирования в пробирке:
Положительный результат (+): видимая алллютинация эритроцитов является положительным результатом и показывает наличие соответствующего антигена.
Отрицательный результат (-): отсутствие видимой алллютинации эритроцитов является отрицательным результатом и показывает отсутствие соответствующего антигена.
ОГРАНИЧЕНИЯ МЕТОДА
1.	Неточное выполнение разделов «Исследование» и «Интерпретация результатов» может привести к неправильным результатам.
2.	Обработанные ферментом эритроциты могут давать неспецифическую реакцию.
3.	Из-за разной экспрессии антигенов действенность этих реагентов против определенных фенотипов может дать более слабую реакцию по сравнению с контрольными клетками. 
4.	Эритроциты, покрытые алло- или аутоантителами такой-же как реагент или подобной специфичности (т.е. клетки, дающие положительную реакцию в прямом антиглобулиновом тесте) могут дать ослабленную реакцию. В исключительных случаях могут наблюдаться ложноположительные реакции.
5.	В инструкции описан метод с использованием реактива Кумбса производства ANTITOXINE GmbH. В принципе можно использовать реактив Кумбса других производителей, тогда лаборатории должны следовать инструкциям данных производителей. 

ANTITOXIN GmbH 
Industriestrasse 88
 69245 Bammental
 Deutschland

730-13-3404 Версия 004 / Июнь 2007